产品货号：
WH0062
中文名称：
植物总RNA提取试剂盒
英文名称：
Total RNA Extraction Kit from Plant
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统，可从植物组织中快速提取总RNA，可同时处理大量不同样品。30-40分钟内即可完成反应，操作简单，提取迅速，溶液毒性小，实验安全。提取的总RNA纯度极高，没有蛋白和其他杂质的污染。
产品特点：
·针对植物材料独特配置，操作更简单、流程更优化。
·配有高效的DNase Ⅰ，可有效去除DNA污染。
·配有CS过滤柱，可有效去除其它杂质。
· RNA纯度更高，无杂质残留，特别适合于对纯度要求很高的下游实验。
·操作安全可靠，无需酚/氯仿抽提，无需氯化铯梯度离心，无需氯化锂或乙醇沉淀。
下游应用：
· RT-PCR
· Northern blot、Dot blot
· Real-time RT-PCR
·芯片分析
· polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆
RNA得率：
试剂盒组成：
储存条件：室温（15-25℃)保存。RNase-Free DNase I,缓冲液RDD和RNase-Free ddH2O（管装)置于2-8℃保存；加入β-巯基乙醇的裂解液RL 4℃可放置一个月。
预防RNase污染，应注意以下几方面：
1．经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
2．使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3．RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4．配制溶液应使用无RNase的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%（V/V)，放置过夜，高压灭菌。）
使用前注意事项：
1．操作前在RL中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1ml RL中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RL 4℃可放置一个月，裂解液RL在储存时可能会形成沉淀，如果有沉淀出现，请加热溶解后使用。
2．植物组织裂解是否充分直接影响到RNA提取的质量和产量，本试剂盒中提供的裂解液RL，主要成分为异硫氰酸胍，适用于大多数植物组织的裂解，但有些植物组织（例如玉米的乳白色胚乳）或丝状真菌，由于次级代谢产物较特殊，异硫氰酸胍使样品产生沉淀，导致RNA提取效果不佳的现象，购买试剂盒时可联系我司业务员更换另一种裂解液HL，将解决该问题。
3．第一次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。
4．以下操作如非指明，均在室温下进行。
DNase I储存液的配制：
将DNase I干粉（1500U）溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中，轻柔混匀，分装后-20℃贮存（可保存9个月）。
注意：从-20℃融化后的DNase I储存液保存于4℃（可保存6周），不要再次冻存。
操作步骤：
1．匀浆处理：
50-100mg植物叶片在液氮中迅速研磨成粉末，加入450 μl RL（使用前请先检查是否已加入β-巯基乙醇），涡旋剧烈震荡混匀。
注意1：在56℃孵育1-3 min将有助于植物组织裂解，但是对于某些富含淀粉的样品，请不要加热处理，防止因淀粉引起的样品膨胀现象。
注意2：由于植物多样性非常丰富，而且同种植物的不同生长发育阶段和不同组织的RNA含量都不相同，请根据具体实验情况选择合适的植物材料的用量。
2．将所有溶液转移至过滤柱CS上（过滤柱CS放在收集管中)，12000rpm（~13400×g)离心2-5 min，小心吸取收集管中的上清至RNase-Free的离心管中，吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
注意：由于裂解液较粘稠，所以将溶液转移至过滤柱时，可以剪去部分吸头末端。
3．缓慢加入0.5倍上清体积的无水乙醇（通常为225 μl），混匀（此时可能会出现沉淀），将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中，12000rpm（~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
注意：如果上清液体积有损失，请相应调整乙醇的加量。
4．向吸附柱CR3中加入350 μl去蛋白液RW1，12000rpm（~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
5．DNase I工作液的配制：取10μl DNase I储存液放入新的RNase-Free离心管中，加入70 μl RDD溶液，轻柔混匀。
6．向吸附柱CR3中央加入80 μl的DNase I工作液，室温放置15 min。
7．向吸附柱CR3中加入350 μl去蛋白液RW1，12000rpm（~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
8．向吸附柱CR3中加入500 μl漂洗液RW （使用前请先检查是否已加入乙醇），室温静置2 min，12000rpm（~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
9．重复步骤8。
10．12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CR3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：此步骤目的是将吸附柱CR3中残余的漂洗液去除，漂洗液的残留，可能会影响后续的RT等实验。
11．将吸附柱CR3放入一个新的RNase-Free离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30-100 μl RNase-Free ddH2O，室温放置2 min，12000rpm（~13400×g)离心2 min，得到RNA溶液。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。RNA样品请在-70℃中保存。
RNA纯度及浓度检测：
完整性：RNA可用普通琼脂糖凝胶电泳（电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE电泳缓冲液；150V，15 min)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA为rRNA，电泳后UV下应能看到非常明显的rRNA条带。28S rRNA的量约为18S rRNA的两倍，说明RNA的完整性较好。
纯度：OD260/OD280比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA，OD260/OD280读数在1.8-2.1之间，比值为2.0是高质量RNA的标志。OD260/OD280读数受测定所用溶液的pH值影响。同一个RNA样品，假定在10mM Tris，pH7.5溶液中测出的OD260/OD280读数1.8-2.1之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯。
浓度：取一定量的RNA提取物，用RNase-Free ddH2O稀释n倍，用RNase-Free ddH2O将分光光度计调零，取稀释液进行OD260,OD280测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：
终浓度（ng/μl）= （OD260)×（稀释倍数n)×40
相关搜索：植物总RNA提取试剂盒，Total RNA Extraction Kit from Plant
产品特点：
·针对植物材料独特配置，操作更简单、流程更优化。
·配有高效的DNase Ⅰ，可有效去除DNA污染。
·配有CS过滤柱，可有效去除其它杂质。
· RNA纯度更高，无杂质残留，特别适合于对纯度要求很高的下游实验。
·操作安全可靠，无需酚/氯仿抽提，无需氯化铯梯度离心，无需氯化锂或乙醇沉淀。
下游应用：
· RT-PCR
· Northern blot、Dot blot
· Real-time RT-PCR
·芯片分析
· polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆
RNA得率：
| 植物叶片（100mg) | 总RNA量（μg) |
| 拟南芥 | ~35 |
| 玉米 | ~25 |
| 西红柿 | ~65 |
| 烟草 | ~60 |
试剂盒组成：
| 组分 | 50T |
| 裂解液RL | 30ml |
| 去蛋白液RW | 140ml |
| 漂洗液RW | 12ml |
| RNase-Free ddH2O（瓶装) | 15ml |
| RNase-Free吸附柱CR3（含2ml收集管) | 50套 |
| RNase-Free过滤柱CS（含2ml收集管) | 50套 |
| DNase I | 1500U |
| 缓冲液RDD | 4ml |
| RNase-Free ddH2O（管装) | 1ml |
| RNase-Free离心管（1.5ml) | 50个 |
储存条件：室温（15-25℃)保存。RNase-Free DNase I,缓冲液RDD和RNase-Free ddH2O（管装)置于2-8℃保存；加入β-巯基乙醇的裂解液RL 4℃可放置一个月。
预防RNase污染，应注意以下几方面：
1．经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
2．使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3．RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4．配制溶液应使用无RNase的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%（V/V)，放置过夜，高压灭菌。）
使用前注意事项：
1．操作前在RL中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1ml RL中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RL 4℃可放置一个月，裂解液RL在储存时可能会形成沉淀，如果有沉淀出现，请加热溶解后使用。
2．植物组织裂解是否充分直接影响到RNA提取的质量和产量，本试剂盒中提供的裂解液RL，主要成分为异硫氰酸胍，适用于大多数植物组织的裂解，但有些植物组织（例如玉米的乳白色胚乳）或丝状真菌，由于次级代谢产物较特殊，异硫氰酸胍使样品产生沉淀，导致RNA提取效果不佳的现象，购买试剂盒时可联系我司业务员更换另一种裂解液HL，将解决该问题。
3．第一次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。
4．以下操作如非指明，均在室温下进行。
DNase I储存液的配制：
将DNase I干粉（1500U）溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中，轻柔混匀，分装后-20℃贮存（可保存9个月）。
注意：从-20℃融化后的DNase I储存液保存于4℃（可保存6周），不要再次冻存。
操作步骤：
1．匀浆处理：
50-100mg植物叶片在液氮中迅速研磨成粉末，加入450 μl RL（使用前请先检查是否已加入β-巯基乙醇），涡旋剧烈震荡混匀。
注意1：在56℃孵育1-3 min将有助于植物组织裂解，但是对于某些富含淀粉的样品，请不要加热处理，防止因淀粉引起的样品膨胀现象。
注意2：由于植物多样性非常丰富，而且同种植物的不同生长发育阶段和不同组织的RNA含量都不相同，请根据具体实验情况选择合适的植物材料的用量。
2．将所有溶液转移至过滤柱CS上（过滤柱CS放在收集管中)，12000rpm（~13400×g)离心2-5 min，小心吸取收集管中的上清至RNase-Free的离心管中，吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
注意：由于裂解液较粘稠，所以将溶液转移至过滤柱时，可以剪去部分吸头末端。
3．缓慢加入0.5倍上清体积的无水乙醇（通常为225 μl），混匀（此时可能会出现沉淀），将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中，12000rpm（~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
注意：如果上清液体积有损失，请相应调整乙醇的加量。
4．向吸附柱CR3中加入350 μl去蛋白液RW1，12000rpm（~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
5．DNase I工作液的配制：取10μl DNase I储存液放入新的RNase-Free离心管中，加入70 μl RDD溶液，轻柔混匀。
6．向吸附柱CR3中央加入80 μl的DNase I工作液，室温放置15 min。
7．向吸附柱CR3中加入350 μl去蛋白液RW1，12000rpm（~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
8．向吸附柱CR3中加入500 μl漂洗液RW （使用前请先检查是否已加入乙醇），室温静置2 min，12000rpm（~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
9．重复步骤8。
10．12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CR3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：此步骤目的是将吸附柱CR3中残余的漂洗液去除，漂洗液的残留，可能会影响后续的RT等实验。
11．将吸附柱CR3放入一个新的RNase-Free离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30-100 μl RNase-Free ddH2O，室温放置2 min，12000rpm（~13400×g)离心2 min，得到RNA溶液。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。RNA样品请在-70℃中保存。
RNA纯度及浓度检测：
完整性：RNA可用普通琼脂糖凝胶电泳（电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE电泳缓冲液；150V，15 min)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA为rRNA，电泳后UV下应能看到非常明显的rRNA条带。28S rRNA的量约为18S rRNA的两倍，说明RNA的完整性较好。
纯度：OD260/OD280比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA，OD260/OD280读数在1.8-2.1之间，比值为2.0是高质量RNA的标志。OD260/OD280读数受测定所用溶液的pH值影响。同一个RNA样品，假定在10mM Tris，pH7.5溶液中测出的OD260/OD280读数1.8-2.1之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯。
浓度：取一定量的RNA提取物，用RNase-Free ddH2O稀释n倍，用RNase-Free ddH2O将分光光度计调零，取稀释液进行OD260,OD280测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：
终浓度（ng/μl）= （OD260)×（稀释倍数n)×40
相关搜索：植物总RNA提取试剂盒，Total RNA Extraction Kit from Plant